一圖讀懂 | 一份核酸報告的誕生

　　對于市民來說，核酸檢測看似只有兩步：登記采樣，等待結果。事實上，在這看似輕松的兩步背后，還凝聚了基因擴增實驗室（PCR實驗室）檢驗人員的大量工作。一份核酸報告的誕生要經歷采樣、標本轉運、標本簽收、核酸提取、核酸轉移、核酸擴增、結果審核……

　　進入PCR實驗室必須“全副武裝”

　　一位位身著厚重防護服的檢驗人員，正在實驗臺前一絲不茍地進行核酸樣本的檢測，汗水不住地從額滲出，嘴里呼出的熱氣模糊了護目鏡。

　　標本擁有了“身份證”

　　很多人以為，核酸采樣后，直接用機器檢測很快就能出結果了。其實，從采樣護士在咽部“輕捻慢攏”后，后續還包括了樣本簽收、核酸提取、核酸轉移、核酸擴增、結果審核等步驟。

　　核酸檢測樣本采集后，采集人員會清點數目，并用密封袋包裝好，用消毒劑噴灑消毒，然后放進樣本轉運箱，由專人送到核酸檢測實驗室。檢測人員收到樣本后會先對轉運箱消毒，并在開啟后對轉運箱內壁和標本采集密封袋二次消毒，之后才是拆開密封袋取出樣本。

　　核酸的采集管上都有條碼信息，簽收人員要理清樣本來自哪一個社區或人群，是單采還是混采。另外，還要留意樣本上的時間，便于日后需要時回溯。

　　之后，核酸樣本就將經歷“奇幻漂流”的第二步——要有“身份證”啦！檢驗人員則將這一步稱為“樣本前處理”。PCR反應是在96孔板上實現的，每一個孔位都有自己獨一無二的身份。

檢驗人員為剛剛送到的樣本進行編號和信息錄入工作

　　看似只是“前處理”，但防備之心可是一點兒也不能松。檢驗人員要識別空管或溢灑情況的發生。尤其在大人群10：1混采時，小小的試管被拭子擠滿，一旦陽性樣本出現了溢灑，一方面可能造成其他樣本結果的污染（假陽性），另一方面對實驗室的生物安全產生威脅——這也是PCR實驗室的檢驗人員同樣要穿成“大白”模樣的原因——醫用帽子、N95口罩、面屏、護目鏡、醫用防護服、隔離衣、一次性鞋套、兩層手套，這些“束縛”卻能給檢驗人員創造最安全的環境。

　　此外，PCR實驗室要求嚴格分區，最好是負壓實驗室。空氣流動只會從外向內，那么實驗室里的污染就不會擴散到外界，可以保證實驗室外面的安全。

　　與病毒“擦肩而過”或只有2毫米

　　拿到“身份證”的核酸樣本并不能直接測試，而是要先提取核酸，對其進行擴增。因此，核酸樣本“奇幻漂流”的下一站，是PCR加樣區——簡單來說，檢驗人員要把病毒的遺傳物質（核糖核酸）給“揪出來”。

　　此時，檢驗人員戴著雙層手套，在生物安全柜內一管一管地擰開螺旋蓋，手工吸取樣本，加入核酸提取板孔中，再擰上螺旋蓋將標本放回原處。檢驗人員與新冠病毒“擦肩而過”的距離可能只隔著兩層乳膠手套——也就是2毫米，但核酸檢測工作不允許他們害怕。

檢驗人員正在進行核酸提取環節中的加樣步驟

　　獲得核酸后，檢驗人員用移液槍將核酸轉移至事先準備好反應液的反應管里，制成反應體系，讓它進入“奇幻漂流”的下一站：擴增分析區。

　　不能出錯，不能有遺漏，不能發生生物安全事故。可以說檢驗人員全身時刻處于高度緊張的狀態。就單說‘加樣’，檢驗人員要用極小的槍頭將每個提取好的核酸，大概是一滴水的四分之一加入到試劑中，每一步操作都必須十二分謹慎。開蓋、加樣雖然有儀器，但現有的儀器在速度上并不能令人滿意，遇上大樣本篩查只能靠手工操作。

　　讓它變多才能檢測出來

　　經歷了復雜費時的前期制備過程，樣本終于來到了“奇幻漂流”的關鍵一站。樣本的采樣質量如何、核酸提取的質量如何、結果如何都將在此處見分曉。

　　這里不得不提一下曾斬獲諾貝爾獎的聚合酶鏈反應（PCR），這是20世紀80年代中期發展起來的一項體外核酸擴增技術，它可以將目標基因片段于數小時內擴增百萬倍至數億倍，成為當今生命科學研究最為重要且廣泛使用的技術手段之一。

　　怎么理解擴增？

　　如果把樣本提取出來的核酸看作是一塊土地，新冠病毒是種子，如何知道土地里有沒有種子？簡單的方法是，加點水和肥料（試劑），讓種子一個變兩個、兩個變四個、四個變八個……病毒是看不到的，而且微量樣本也不容易檢測到，所以要讓它變多，才方便檢測出來。

　　經過復雜的前期制備工作，才能在PCR儀上進行擴增檢測。上機后，就是歷時約1.5小時擴增檢測，而且中間不能有停頓、不能有斷電、不能有儀器故障，核酸檢測才能完成。

　　當反應管在機器上開始檢驗后，也就意味著“開弓沒有回頭箭”——從采樣到核酸制備任何一個環節出現問題都可能導致返工重測，從而使報告時間加倍。

　　3月15日，國家衛健委發布《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第九版）》。其中，《方案》將解除隔離管理和出院標準修改為“連續兩次新型冠狀病毒核酸檢測N基因和ORF基因Ct值均≥35（熒光定量PCR方法，界限值為40，采樣時間至少間隔24小時）”，這也讓很多“小白”知道，這兒的“Ct”并非到醫院拍個CT，而是指擴增的閾值。簡單來說， Ct值越低，說明陽性越強；Ct值越高，說明陽性越弱。

　　作為初篩實驗室，只能向疾控中心報告“疑似陽性”，隨后根據疾控的要求轉運原管標本以供復核。而PCR實驗室也會通過紫外線消毒，通常陰性樣本會儲存一兩天以備查驗。

　　向你飛奔而來的報告背后是汗水

　　檢測人員還需要對擴增結果進行分析：包括同批隨樣本檢測的陰陽性質控結果是否在控、基線設置、逐孔分析內標及樣本結果是否正常等。當陰陽性質控全部符合檢測要求，排除假陰性、假陽性可能，對異常結果樣本及時進行復核，確保無誤后才能最終報告結果，并上傳。

這幾天，PCR實驗室里的檢驗人員都在超負荷工作

　　隨著核酸樣本量不斷增大，檢驗人員一直是在超負荷運轉。防護服是不透氣的，全身罩在里面，剛穿上就會很熱。加之機器一刻不停，熱量積聚一天后整個實驗室會非常悶熱，即使開著空調室內溫度也會達到28-30℃。此外，實驗室里靜電也很強烈，因此也特別干燥。為及時完成工作任務，很多人都是“5+2”、“白+黑”的節奏在工作。

　　來源：臨沂疾控